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Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5) 分子生物試劑

  • 更新時間:  2023-07-27
  • 產(chǎn)品型號:  12391
  • 簡單描述
  • Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
    貨  號:12391

    產(chǎn)品規(guī)格:5

    原 產(chǎn) 地:德國

    產(chǎn)品詳細(xì)信息
    EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
詳細(xì)介紹

Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)


純化得到至多10 mg的無內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA

  • 純化得到的DNA內(nèi)毒素水平低于0.1 EU/µg

  • 純化流程快,同時去除內(nèi)毒素

  • 獲得高產(chǎn)量、高拷貝質(zhì)粒DNA

  • 使用LyseBlue,獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù),可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges過濾快速澄清裂解液,DNA的產(chǎn)量500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)和10 mg(Giga)。制備的DNA 純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度,適合超轉(zhuǎn)染級純的應(yīng)用。



原理

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法(參見"Endotoxin levels in plasmid preparations")。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟,獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設(shè)計的過濾裝置,用于代替細(xì)菌細(xì)胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀,清除細(xì)菌裂解液,相比離心可大量節(jié)約時間,減少1小時的質(zhì)粒純化時間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內(nèi)部真空方式輕松高效的清除大量細(xì)菌裂解液(注意:該試劑盒不包含瓶子)。

QIAGEN-tips中dute的陰離子交換樹脂(不提供EndoFree Plasmid Buffer Set)專為核酸純化而開發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當(dāng)。由重力流驅(qū)動并持續(xù)運轉(zhuǎn)的預(yù)裝 QIAGEN-tips,限度減少手動制備質(zhì)粒所需的時間。整個QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì),如benfen,氯仿,溴化乙錠和CsCl,限 度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素,又稱脂多糖或LPS,是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細(xì)胞膜的組成部分,如大腸桿菌(參見Bacterial cell wall)。 內(nèi)毒素在質(zhì)粒裂解純化過程中釋放出來,并顯著降低內(nèi)毒素敏感細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率。此外,內(nèi)毒素與DNA競爭“自由"轉(zhuǎn)染試劑,影響轉(zhuǎn)染實驗中質(zhì)粒DNA的攝 取。內(nèi)毒素也誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞發(fā)生非特異性免疫反應(yīng),從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂類,如IL-1和前列腺素等的 合成??傮w而言,內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實驗中是不可控變量,影響結(jié)果的可重復(fù)性,使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中,內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補 體級聯(lián),干擾研究。

Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

操作流程

在堿性條件下,細(xì)菌細(xì)胞裂解,使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后,將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上,在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下,質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除 RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì),超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫(參見QIAGEN Plasmid Kit procedures)。最后DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。



應(yīng)用

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應(yīng)用,包括:

  • 轉(zhuǎn)染,包括原代、敏感以及懸浮細(xì)胞

  • 基因治療研究

  • 基因沉默

  • 顯微注射




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